产品货号：
RFT036
中文名称：
土壤基因组DNA提取试剂盒
英文名称：
Soil genomic DNA Extraction Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本公司的土壤DNA提取试剂盒采用独特的腐殖酸去除液(缓冲液R2)能够有效去除腐殖酸；吸附柱CG能能有效去除金属等抑制因子，提纯得到的基因组DNA可直接用于PCR反应，酶切或定量实验。
试剂盒组份：
准备工作：
1.准备55℃，70℃水浴；无水乙醇；异丙醇；制冰机；1.5ml离心管；2ml离心管
2.按照标签所示在漂洗缓冲液WB2中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3.每次使用前请检查缓冲液R2，缓冲液R3是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。
标准操作步骤：
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、称0.3-0.5g土壤置于2ml离心管中，加入0.4g Glass Beads，再加入780μl缓冲液R1与100μl缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5min。
注：对含水量丰富的样品，可以预先离心除去部分水分后再称取样品。缓冲液R2是腐殖酸去除剂，100μl对大部分样品来说足以有效除去腐殖酸等抑制因子。对一些腐殖酸含量特别丰富的土壤，缓冲液R2的量可以适当增加，但不能超过250μl，否则会严重影响DNA的得率。
2、加入200μl缓冲液R3(R3如有沉淀37℃水浴完全溶解后再用)，涡旋混匀。70℃水浴处理10min。期间振荡几次。
注：如果要纯化革兰氏阳性菌的DNA，请在70℃处理完后，再90℃水浴处理2min。
3、12000rpm(~13000g)离心1分钟，取600μl上清到1.5ml离心管中，加入180μl缓冲液R4混匀。
注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量最好不超过80%。
4、冰上放置5分钟。12000rpm(~13000g)离心1分钟。转移上清到新的1.5ml离心管中。
注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量最好不超过80%。
5、加入0.7倍上清体积的异丙醇颠倒混匀。12000rpm(~13000g)离心2分钟。小心地倒掉上清。
注：如果样品中DNA含量很低，加入异丙醇混匀后-20℃放置1小时。
6、加入350μl缓冲液R5，待沉淀完全溶解后加入300μl无水乙醇，混匀。
注：为加速溶解沉淀，可置样品于55℃水浴中。
7、将上步混合液转移到吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中)，12000rpm离心30秒，倒掉滤过液。
8、向吸附柱CG中加入500μl漂洗缓冲液WB1，12,000rpm (~13,000×g)离心30秒，倒掉废液。
9、向吸附柱CG中加入600μl漂洗缓冲液WB2(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000rpm (~13000g)离心30秒，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
10、向吸附柱CG中加入600μl漂洗缓冲液WB2，12,000rpm (~13000g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CG放入收集管中。
11、12,000rpm(~13000g)离心2分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注：此步骤非常重要，其目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
12、将吸附柱CG转入一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50–100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000rpm(~13000g)离心2分钟。
注意：
a.洗脱缓冲液体积最好不少于50μl，体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
13、DNA产物-20℃保存。
大量操作步骤(针对含微量核酸的样品)
1、称1-5g土壤置于10ml离心管中，加入1g Glass Beads，再加入3ml缓冲液R1与200μl缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5分钟。
2、加入600μl缓冲液R3，涡旋混匀。70℃水浴处理10分钟。期间振荡几次。
3、3000g离心3分钟，转移上清到新的离心管中，加入550μl缓冲液R4混匀。
4、冰上放置5分钟。8000g离心10分钟。转移上清到新的离心管中。
5、以下按标准操作步骤的第五步继续操作。
DNA浓度及纯度检测：
基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时，OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。
常见问题分析：
储存条件：室温，有效期12个月。
相关搜索：土壤基因组DNA提取试剂盒，Soil genomic DNA Extraction Kit
试剂盒组份：
| 试剂盒组成 | 50次 | 贮存方式 |
| 缓冲液R1 | 40ml | 常温 |
| 缓冲液R2 | 6ml | 常温 |
| 缓冲液R3 | 6ml | 常温 |
| 缓冲液R4 | 10ml | 常温 |
| 缓冲液R5 | 20ml | 常温 |
| 漂洗缓冲液WB1 | 30ml | 常温 |
| 漂洗缓冲液WB2 (浓缩液) | 13ml | 室温 |
| 洗脱缓冲液EB | 15ml | 室温 |
| Glass beads | 20g | 常温 |
| 吸附柱CG | 50个 | 室温 |
| 收集管(2ml) | 50个 | 室温 |
| 说明书 | 1份 |
准备工作：
1.准备55℃，70℃水浴；无水乙醇；异丙醇；制冰机；1.5ml离心管；2ml离心管
2.按照标签所示在漂洗缓冲液WB2中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3.每次使用前请检查缓冲液R2，缓冲液R3是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。
标准操作步骤：
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、称0.3-0.5g土壤置于2ml离心管中，加入0.4g Glass Beads，再加入780μl缓冲液R1与100μl缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5min。
注：对含水量丰富的样品，可以预先离心除去部分水分后再称取样品。缓冲液R2是腐殖酸去除剂，100μl对大部分样品来说足以有效除去腐殖酸等抑制因子。对一些腐殖酸含量特别丰富的土壤，缓冲液R2的量可以适当增加，但不能超过250μl，否则会严重影响DNA的得率。
2、加入200μl缓冲液R3(R3如有沉淀37℃水浴完全溶解后再用)，涡旋混匀。70℃水浴处理10min。期间振荡几次。
注：如果要纯化革兰氏阳性菌的DNA，请在70℃处理完后，再90℃水浴处理2min。
3、12000rpm(~13000g)离心1分钟，取600μl上清到1.5ml离心管中，加入180μl缓冲液R4混匀。
注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量最好不超过80%。
4、冰上放置5分钟。12000rpm(~13000g)离心1分钟。转移上清到新的1.5ml离心管中。
注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量最好不超过80%。
5、加入0.7倍上清体积的异丙醇颠倒混匀。12000rpm(~13000g)离心2分钟。小心地倒掉上清。
注：如果样品中DNA含量很低，加入异丙醇混匀后-20℃放置1小时。
6、加入350μl缓冲液R5，待沉淀完全溶解后加入300μl无水乙醇，混匀。
注：为加速溶解沉淀，可置样品于55℃水浴中。
7、将上步混合液转移到吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中)，12000rpm离心30秒，倒掉滤过液。
8、向吸附柱CG中加入500μl漂洗缓冲液WB1，12,000rpm (~13,000×g)离心30秒，倒掉废液。
9、向吸附柱CG中加入600μl漂洗缓冲液WB2(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000rpm (~13000g)离心30秒，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
10、向吸附柱CG中加入600μl漂洗缓冲液WB2，12,000rpm (~13000g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CG放入收集管中。
11、12,000rpm(~13000g)离心2分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注：此步骤非常重要，其目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
12、将吸附柱CG转入一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50–100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000rpm(~13000g)离心2分钟。
注意：
a.洗脱缓冲液体积最好不少于50μl，体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
13、DNA产物-20℃保存。
大量操作步骤(针对含微量核酸的样品)
1、称1-5g土壤置于10ml离心管中，加入1g Glass Beads，再加入3ml缓冲液R1与200μl缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5分钟。
2、加入600μl缓冲液R3，涡旋混匀。70℃水浴处理10分钟。期间振荡几次。
3、3000g离心3分钟，转移上清到新的离心管中，加入550μl缓冲液R4混匀。
4、冰上放置5分钟。8000g离心10分钟。转移上清到新的离心管中。
5、以下按标准操作步骤的第五步继续操作。
DNA浓度及纯度检测：
基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时，OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。
常见问题分析：
| 常见问题 | 可能原因 | 建议 |
| 没有洗脱出DNA | 加入缓冲液R5后没有加入无水乙醇 | 样品过柱前，必须用无水乙醇调整核酸结合条件，否则核酸不能挂柱。 |
| 漂洗缓冲液WB2中没有加入乙醇 | 漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。无水乙醇加入量不正确会导致核酸提取量大大降低。 | |
| 低浓度的DNA量 | 缓冲液R2使用过量 | 按照步骤1加入适量缓冲液R2 |
| 洗脱体积太小 | 洗脱体积不能低于50μl，如洗脱体积太小，回收率将大大降低。 | |
| 洗涤不恰当 | 漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。无水乙醇加入量不正确会导致核酸提取量大大降低。 | |
| 低A260/A280比率 | 蛋白污染 | 不要忽略步骤8中用漂洗缓冲液WB1冲洗吸附柱 |
| 洗脱液pH值不合适 | 确保使用的洗脱液pH在8.0以上，如低于8.0将导致DNA洗脱量过低。 | |
| 下游应用不好 | 提取的DNA含盐量高 | 漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。 |
| 提取的DNA含有乙醇 | 步骤11空甩柱子2分钟非常关键，彻底去除漂洗液中的乙醇。 | |
| 抑制PCR反应 | 增加缓冲液R2用量，彻底去除腐殖酸等PCR抑制因子；步骤4中确保不要吸取到沉淀。 |
储存条件：室温，有效期12个月。
相关搜索：土壤基因组DNA提取试剂盒，Soil genomic DNA Extraction Kit